AbiLux Firefly Luciferase Assay Kit
Состав | Количество | Каталожный номер | Цена, руб | Наличие |
---|---|---|---|---|
Набор из двух реагентов | 10 мл | LUX-011-3-10ML | 11 900 | В наличии |
Набор из двух реагентов | 100 мл | LUX-011-3-100ML | 89 250 | В наличии |
Описание
Набор представляет собой систему из 2 реагентов на основе D-люциферина, использующуюся для количественного определения люциферазы светлячка (Firefly luciferase), которая является одним из наиболее чувствительных инструментов для анализа экспрессии генов.
Характеристики
Данный продукт представлен в виде 2 отдельных реагентов:
1) буфер для анализа (реагент #1),
2) субстрат люциферазы светлячка – Firefly luciferase (реагент #2).
Параметр | Значение |
---|---|
Назначение | Детекция люциферазы светлячка (Firefly Luciferase) |
Принцип | Биолюминесценция |
Анализ | Люминометрический |
Сравнение эффективности AbiLux Firefly Luciferase Assay Kit c конкурентом для определения активности люциферазы.
Подробное описание
Репортерные гены часто используются в клеточной биологии для изучения экспрессии генов и других клеточных явлений, таких как активность рецепторов, передача внутриклеточного сигнала, процессинг мРНК, фолдинг белков и белок-белковые взаимодействия.
Люциферин – природное соединение, выделенное из светлячков, хемилюминесценция которого при 560 нм возникает в результате АТФ-зависимого процесса преобразования химической энергии его окисления через электронный переход с образованием молекулы оксилюциферина. Люцифераза светлячка (мономерный белок с молекулярной массой 61 кДа) катализирует окисление люциферина с использованием АТФ и Mg2+ в качестве косубстрата.
Люцифераза светлячка (Firefly luciferase) нашла широкое применение в качестве репортера благодаря тому, что фермент становится активным сразу после трансляции, не требуя посттрансляционного процессинга, а также имеет самую высокую квантовую эффективность среди всех хемилюминесцентных реакций. Люцифераза кодируется геном luc, который широко используется в качестве репортерного гена в различных клеточных линиях. Из-за низкого фона, присущего методу хемилюминесценции, обнаружение экспрессии гена luc может быть выполнено на очень низком уровне.
Визуальный протокол:
- Перед проведением анализа требуется приготовить рабочий раствор, для чего необходимо аккуратно добавить весь объем буфера для анализа люциферазы (реагент #1) в лиофилизированный субстрат на основе D-люциферина (реагент #2). Перемешивать переворачиванием до полного растворения субстрата.
- Полученный готовый рабочий раствор (3Х) необходимо немедленно разаликвотить, заморозить и хранить при температуре – 80°С в защищенном от света месте.
- Для количественного определения люциферазы, экспрессируемой клетками, в каждую лунку 96-луночного планшета необходимо аккуратно добавить 80 мкл рабочей ростовой среды (например, DMEM, RPMI и др), стараясь не повредить клетки.
- Далее в каждую исследуемую лунку добавить 40 мкл готового рабочего раствора (3Х) AbiLux Firefly Luciferase Assay Kit, приготовленного раннее.
- Инкубировать при комнатной температуре в течение 3 минут до полного лизиса клеток.
- Провести измерение интенсивности люминесценции.
Условия хранения
Буфер для анализа люциферазы (реагент #1) и лиофилизированный субстрат на основе D-люциферина (реагент #2) – необходимо хранить в защищенном от света месте при температуре – 20°С. Готовый рабочий раствор после смешения реагентов #1 и #2 необходимо хранить строго в защищённом от солнечного света месте при температуре -80°С в течение 6 месяцев, либо при температуре -20°С не более месяца.
Cite as:
Ключевые слова
Люциферин, субстрат люциферазы светлячка, биолюминесценция, Firefly luciferase substrate, bioluminescence