His-Tag носители (сорбенты)

Полигистидиновая метка (Poly-His-Tag или просто His-Tag) является самой популярной меткой, используемой в аффинной хроматографии белков. Из-за своего небольшого размера (всего 6 повторяющихся аминокислотных остатков) метка практически не меняет функции белка, а низкая иммуногенность и универсальность делает метку крайне востребованной. В основе принципа His-Tag хроматографической очистки белков, она же металл-хелатная аффинная хроматография лежит взаимодействие между ионами металлов и имидазольным кольцом гистидина.

Аффинные носители полностью изготавливаются нами – начиная от синтеза агарозного носителя, до его дальнейшей химической модификации. В настоящее время мы предлагаем следующие продукты, основанные на двух различных лигандах-хелаторах:

1) Традиционный лиганд NTA – нитрилотриуксусная кислота.

2) Лиганд нового поколения AZUR  с повышенной устойчивостью к EDTA – аналог лиганда используемого в сорбенте Cytiva Ni Sepharose excel и колонках HisTrap excel

Кроме того, при необходимости возможно исполнение носителя с различными связанными ионами помимо традиционного Ni: Металл, с которым связан лиганд в хелатном комплексе может заметно влиять на аффинность и специфичность металл-хелатной хроматографии. Обычно действует следующее правило: чем выше выход белка, тем менее специфично его выделение. По увеличению специфичности (и, соответственно, уменьшению аффинности), ионы, как правило, располагаются в следующей последовательности: Cu2+, Ni2+, Zn2+, Co2+.

Также возможно исполнение носителя с различным диаметром частиц носителя: Чем больше размер использованных микросфер носителя, тем выше скорость потока при металл-хелатной хроматографии низкого давления, однако, как правило, меньше выход очищенного белка. Абисенс поставляет носитель размером в интервале 50-150 мкм, носитель более узкого распределения и определенного размера поставляет по запросу. 

Связанный ион металла

Лиганд AZUR

Лиганд NTA

Никель / Ni2+

Ni-AZUR

Ni-NTA

Кобальт / Co2+

Co-AZUR

Co-NTA

Цинк / Zn2+

Zn-AZUR

Zn-NTA

Медь / Cu2+

Cu-AZUR

Cu-NTA

Без иона металла

(для активации пользователем)

IonLess-AZUR

IonLess-NTA

Продукты

AbiFlow 100 Ni-NTA Agarose
Суспензия для самостоятельного изготовления колонок
(50% суспензия в консервирующем буфере)

Каталожный номер

Фасовка, мл

Цена, руб

Срок изготовления

FLO-911-102-10ML

10 мл носителя

7 800

В наличии

FLO-911-102-50ML

50 мл носителя

33 100

В наличии

FLO-911-102-250ML

250 мл носителя

142 700

В наличии

Классический тип носителя для металл-хелатной хроматографии белков. Представляет собой микросферы средним диаметром ок. 100 мкм на основе кросс-сшитой агарозы фармакопейного качества с иммобилизованным комплексом лиганда нитрилотриуксусной кислоты с никелем (NTA-Ni). Предназначен для реализации металл-хелатной хроматографии в FPLC, спин- и батч- форматах.

Рекомендуемый протокол регенерации носителей на основе AbiFlow Ni-NTA Agarose
Характеристики

Параметр

Значение

Тип носителя

Агароза

Размер микросфер носителя

50-150 мкм

Аффинность

His-Tag

Назначение

Специфическое связывание и очистка белков с His-Tag меткой

Лиганд

NTA

Связанный ион

Ni2+

Стабильность хелатора

Стабилен в буферах с 10 мМ DTT и 1 мМ EDTA

Хранения

+4 ОС

Cite as:

The protein was purified using chromatography column with AbiFlow 100 Ni-NTA Agarose resin (Abisense, Russia).

Ключевые слова

Ni-NTA, His-Tag, protein purification

AbiFlow 100 Ni-AZUR Agarose
Суспензия для самостоятельного изготовления колонок
(50% суспензия в консервирующем буфере)

Каталожный номер

Фасовка, мл

Цена, руб

Срок изготовления

FLO-931-102-10ML

10 мл носителя

7 800

В наличии

FLO-931-102-50ML

50 мл носителя

33 100

В наличии

FLO-931-102-250ML

250 мл носителя

142 700

В наличии

Носитель AbiFlow 100 Ni-AZUR Agarose — разработка Abisense для очистки белков методом металл-хелатной хроматографии низкого давления. Носитель представляет собой микросферы со средним диметром 100 мкм, полученные путем кросс-сшивания природного полисахарида агарозы фармакопейного качества, с иммобилизованным комплексом тетра-дентантного хелатирующего лиганда с никелем (AZUR-Ni). Предназначен для реализации металл-хелатной хроматографии в FPLC, спин- и батч- форматах. Размер микросфер влияет на скорость потока и выход белка.

Носитель выдерживает самые высокие концентрации хелаторов, таких как ЭДТА и ДТТ, которые обычно используются в буферах для клеточных культур млекопитающих (вплоть до 20 мМ DTT и EDTA). Лиганд сопоставим с тем, который используется в Cytiva Ni Sepharose excelОбращаем Ваше внимание, что носитель на основе AZUR не может быть регенерирован по стандартному протоколу с использованием EDTA.

 

Рекомендуемый протокол регенерации носителей на основе AbiFlow AZUR Agarose
Характеристики

Параметр

Значение

Тип носителя

Агароза

Размер микросфер носителя

50-150 мкм*

Аффинность

His-Tag

Назначение

Специфическое связывание и очистка белков с His-Tag меткой

Лиганд

AZUR: улучшенный тетрадентантный лиганд для His-Tag

Связанный ион

Ni2+

Стабильность хелатора

Стабилен в буферах с 20 мМ DTT и 20 мМ EDTA

Хранения

+4 ОС

* Микросферы с более узким диапазоном и другими средними размерами поставляются по договоренности

Cite as:

The protein was purified using chromatography column with AbiFlow 100 Ni-AZUR Agarose resin (Abisense, Russia).

Ключевые слова

His-Tag, Ni-NTA, Ni-AZUR, protein purification