His-Tag носители (сорбенты)
Полигистидиновая метка (Poly-His-Tag или просто His-Tag) является самой популярной меткой, используемой в аффинной хроматографии белков. Из-за своего небольшого размера (всего 6 повторяющихся аминокислотных остатков) метка практически не меняет функции белка, а низкая иммуногенность и универсальность делает метку крайне востребованной. В основе принципа His-Tag хроматографической очистки белков, она же металл-хелатная аффинная хроматография лежит взаимодействие между ионами металлов и имидазольным кольцом гистидина.
Аффинные носители полностью изготавливаются нами – начиная от синтеза агарозного носителя, до его дальнейшей химической модификации. В настоящее время мы предлагаем следующие продукты, основанные на двух различных лигандах-хелаторах:
1) Традиционный лиганд NTA – нитрилотриуксусная кислота.
2) Лиганд нового поколения AZUR с повышенной устойчивостью к EDTA – аналог лиганда используемого в сорбенте Cytiva Ni Sepharose excel и колонках HisTrap excel.
Кроме того, при необходимости возможно исполнение носителя с различными связанными ионами помимо традиционного Ni: Металл, с которым связан лиганд в хелатном комплексе может заметно влиять на аффинность и специфичность металл-хелатной хроматографии. Обычно действует следующее правило: чем выше выход белка, тем менее специфично его выделение. По увеличению специфичности (и, соответственно, уменьшению аффинности), ионы, как правило, располагаются в следующей последовательности: Cu2+, Ni2+, Zn2+, Co2+.
Также возможно исполнение носителя с различным диаметром частиц носителя: Чем больше размер использованных микросфер носителя, тем выше скорость потока при металл-хелатной хроматографии низкого давления, однако, как правило, меньше выход очищенного белка. Абисенс поставляет носитель размером в интервале 50-150 мкм, носитель более узкого распределения и определенного размера поставляет по запросу.
Продукты
AbiFlow 100 Ni-NTA Agarose
Суспензия для самостоятельного изготовления колонок
(50% суспензия в консервирующем буфере)
Каталожный номер | Фасовка, мл | Цена, руб | Срок изготовления |
---|---|---|---|
FLO-911-102-10ML | 10 мл носителя | 7 800 | В наличии |
FLO-911-102-50ML | 50 мл носителя | 33 100 | В наличии |
FLO-911-102-250ML | 250 мл носителя | 142 700 | В наличии |
Классический тип носителя для металл-хелатной хроматографии белков. Представляет собой микросферы средним диаметром ок. 100 мкм на основе кросс-сшитой агарозы фармакопейного качества с иммобилизованным комплексом лиганда нитрилотриуксусной кислоты с никелем (NTA-Ni). Предназначен для реализации металл-хелатной хроматографии в FPLC, спин- и батч- форматах.
Рекомендуемый протокол регенерации носителей на основе AbiFlow Ni-NTA Agarose
Характеристики
Параметр | Значение |
---|---|
Тип носителя | Агароза |
Размер микросфер носителя | 50-150 мкм |
Аффинность | His-Tag |
Назначение | Специфическое связывание и очистка белков с His-Tag меткой |
Лиганд | NTA |
Связанный ион | Ni2+ |
Стабильность хелатора | Стабилен в буферах с 10 мМ DTT и 1 мМ EDTA |
Хранения | +4 ОС |
Cite as:
The protein was purified using chromatography column with AbiFlow 100 Ni-NTA Agarose resin (Abisense, Russia).
Ключевые слова
Ni-NTA, His-Tag, protein purification
AbiFlow 100 Ni-AZUR Agarose
Суспензия для самостоятельного изготовления колонок
(50% суспензия в консервирующем буфере)
Каталожный номер | Фасовка, мл | Цена, руб | Срок изготовления |
---|---|---|---|
FLO-931-102-10ML | 10 мл носителя | 7 800 | В наличии |
FLO-931-102-50ML | 50 мл носителя | 33 100 | В наличии |
FLO-931-102-250ML | 250 мл носителя | 142 700 | В наличии |
Носитель AbiFlow 100 Ni-AZUR Agarose — разработка Abisense для очистки белков методом металл-хелатной хроматографии низкого давления. Носитель представляет собой микросферы со средним диметром 100 мкм, полученные путем кросс-сшивания природного полисахарида агарозы фармакопейного качества, с иммобилизованным комплексом тетра-дентантного хелатирующего лиганда с никелем (AZUR-Ni). Предназначен для реализации металл-хелатной хроматографии в FPLC, спин- и батч- форматах. Размер микросфер влияет на скорость потока и выход белка.
Носитель выдерживает самые высокие концентрации хелаторов, таких как ЭДТА и ДТТ, которые обычно используются в буферах для клеточных культур млекопитающих (вплоть до 20 мМ DTT и EDTA). Лиганд сопоставим с тем, который используется в Cytiva Ni Sepharose excel. Обращаем Ваше внимание, что носитель на основе AZUR не может быть регенерирован по стандартному протоколу с использованием EDTA.
Рекомендуемый протокол регенерации носителей на основе AbiFlow AZUR Agarose
Характеристики
Параметр | Значение |
---|---|
Тип носителя | Агароза |
Размер микросфер носителя | 50-150 мкм* |
Аффинность | His-Tag |
Назначение | Специфическое связывание и очистка белков с His-Tag меткой |
Лиганд | AZUR: улучшенный тетрадентантный лиганд для His-Tag |
Связанный ион | Ni2+ |
Стабильность хелатора | Стабилен в буферах с 20 мМ DTT и 20 мМ EDTA |
Хранения | +4 ОС |
* Микросферы с более узким диапазоном и другими средними размерами поставляются по договоренности
Cite as:
The protein was purified using chromatography column with AbiFlow 100 Ni-AZUR Agarose resin (Abisense, Russia).
Ключевые слова
His-Tag, Ni-NTA, Ni-AZUR, protein purification